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Log inINTRODUCTION AND OBJECTIVES: Excluding non-melanoma skin tumors breast cancer is the most common cancer, and the leading cause of cancer death among women worldwide. Breast cancer has been recognized as a major public health problem in the world. The treatments include surgery, radiation, chemotherapy, hormone and targeted therapy. In Brazil, the most common chemotherapy regimen is the FAC-D protocol (5-fluorouracil, doxorubicin and cyclophosphamide, with docetaxel or paclitaxel), and produces many adverse effects, which negative impact in the quality of life and in the treatment success. Açaí, a Brazilian native fruit, has already been demonstrated to exhibit anti-inflammatory, antioxidant, anticancer and cardioprotective effects. Thus, the present study aimed to evaluation of the combined use of açaí and the FAC-D protocol in breast cancer model in vivo. MATERIAL AND METHODS: Ethical approval by CEUA UEZO (No. 008/2014). Breast cancer was induced in 40 females Wistar (8-week-old, 150 g) by a single subcutaneous injection of 25mg/kg of 7,12-dimethylbenzanthracene (DMBA) in the mammary gland. Açaí treatment (200 mg/kg) or saline was initiated after 60 days, via gastric tube for 45 consecutive days. FAC-D protocol (5-fluorouracil, doxorubicin, cyclophosphamide and docetaxel) were initiated after 105 days of induction by intraperitoneal injection for 3 cycles with 7-day break each. After treatment, the blood (leukogram, glycemia and biochemical), tumor (macroscopic and histological), heart (macroscopic, histological and immunohistochemical), liver (macroscopic and histological) and kidneys (macroscopic and histological) were collected for analyses. RESULTS AND CONCLUSION: Breast cancer was found as a cystic mass with fibrotic pattern in the mammary gland. Histological analysis showed invasive carcinoma area in both groups, however, in the saline group there is a greater presence of inflammatory clusters. No difference was observed based on body weight, glycemia, AST, ALT, creatinine and urea in both groups. Moreover, no difference was evidenced in the macroscopic and histological analysis of the liver and kidneys. Though, açaí treatment decreased CK and CKMB levels and increased in the neutrophils and monocytes number. Heart histopathological showed normal myocardium histology in the açaí treatment, while in the saline group revealed higher toxicity effects with loss of architecture of cardiac tissue. Furthermore, the picrosirius red analysis revealed a greater marking in the açaí heart samples while, H2AX immunohistochemistry revealed a lower immunostaining in the açaí group. These results demonstrated that açaí decreased inflammation in tumor environment and exhibit a protection of chemotherapy drugs cardiotoxicity with increased in the immune response of animals, suggesting that açaí can be used as an adjuvant treatment associated with chemotherapy agents.
Fabiana Guerra
Primeiramente gostaria de parabenizar o grupo pelo trabalho desenvolvido.
Gostaria também de levantar alguns questionamentos que não consegui compreender muito bem:
1. Foram utilizados ratos fêmeas da espécie wistar. O animal não foi citado, somente a espécie.
2. Como foi feita a preparação do açaí para ser administrado? Foi o extrato? Por que a salina foi utilizada como veículo?
3. Existe algum grupo de animais com a indução dos tumores de mama sem nenhum tipo de tratamento? Esse grupo seria importante para comparação do processo inflamatório desenvolvido no microambiente tumoral para comparar com os tratamentos utilizados.
4. Não entendi com muita clareza a formação do tumor mesmo com o tratamento com os fármacos padrão e seu uso com salina. Esse tumor seria maior ou menor em tamanho ou invasividade que o tumor do grupo sem nenhum tratamento?
4. Seria interessante explorar mais esse microambiente inflamatório formado principalmente quanto às citocinas inflamatórias, já que o perfil celular é diferenciado com os tratamentos.
5. Também vale considerar a análise de espécies reativas de oxigênio, já que o açaí apresenta atividade antioxidante. Esta característica pode estar associada com a cardioproteção apresentada, levando em consideração o mecanismo de ação do regime FAC-D.
Paula Sabbo Bernardo
Boa tarde, Jéssica. Primeiramente, gostaria de te parabenizar pelo trabalho. Os resultados são muito interessantes e apresentam grande relevância no contexto do câncer de mama. Eu fiquei com algumas dúvidas e curiosidades sobre o seu trabalho.
1. Vocês já sabem qual seria o mecanismo de ação desse extrato, se ele inibe alguma via de sinalização de sobrevivência celular? Você mostrou que reduz o dano tecidual no coração pela marcação de gama H2AX, esse extrato do açaí teria alguma influência em vias de reparo de DNA?
2. Após os 60 dias do uso do DMBA, como vocês confirmaram o desenvolvimento do tumor?
3. Não sei se seria possível dentro do tempo que vocês avaliaram, mas vocês chegaram a avaliar formação de metástases?
4. Como foi a feita a quantificação das marcações como a de H2AX?
Muito obrigada e mais uma vez, parabéns pelo trabalho.
Jéssica Alessandra Perini
Boa tarde, Paula. Muito obrigada pelas considerações. 1. Ainda não fechamos por completo o mecanismo do extrato utilizado nessa parte de dano tecidual. Vimos primeiramente o mecanismo no carcinoma mamário propriamente dito com diminuição do processo inflamatório (redução de COC-2, PGE-2 e IL-10) e angiogênico (diminuição de VEGF e seu receptor). Ainda pretendemos fazer mais algumas análises nesse modelo, e seus questionamentos podem nos ajudar a nortear melhor quais análises realizar para melhor elucidar esses mecanismos. Mas agora no momento, ainda ficarei devendo essas respostas.2. A confirmação do tumor com 60 dias é feita pela palpação das mamas, onde normalmente palpamos um nódulo cístico e rígido. 3. No tempo avaliado vimos apenas uma metástase hepática, sendo confirmada por análise histológica, porém por ser apenas uma, não demos continuidade a outros marcadores. 4. A quantificação foi realizada em um microscópio óptico conectado a uma câmera digital onde foram fotografados de cada lâmina 10 campos aleatórios com maior aumento (40X). Essas imagens foram analisadas em programa Image Pro Plus e a média dos valores obtidos nos campos observados das áreas demarcadas (per área) foram expressas em porcentagem. Agradeço mais uma vez pelas contribuições que servirão para melhorar nosso trabalho. Obrigada.
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Jéssica Alessandra Perini
Boa tarde, Fabiane. Muito obrigada pelas considerações.
1. Iremos fazer a alteração e inclusão do animal utilizado na parte da metodologia. 2. O açaí utilizado é o extrato liofilizado do fruto total do açaí e a utilização da solução salina é realizada pois é o meio que melhor diluí o extrato do açaí. 3. Sim, fizemos um grupo de indução de tumores mamários sem nenhum tipo de tratamento, entretanto esses resultados foram apresentados em outras sessões de pôsteres e foram resultados do meu projeto de mestrado. 4. O desenvolvimento tumoral acontece normalmente entre a partir da 8 semana após a indução e durante esse período nenhuma outra intervenção foi realizada nos animais, ou seja, até aqui nenhum tratamento foi iniciado nos animais. O açaí ou a salina foram iniciados depois desse tempo, possibilitando assim o crescimento do tumor. Além disso, os quimioterápicos (protocolo FAC-D) foram iniciados apenas no final do tratamento (3 semanas antes da eutanasia dos animais), não sendo eficazes em diminuir completamente os tumores, entretanto, vemos que os animais que receberam o açaí apresentam volume tumoral menor em comparação com os animais que receberam a salina. 5. Sim, já é sabido na literatura que o açaí apresenta atividade antioxidante e essa sua capacidade já foi demonstrada em outros estudos estar envolvida na possível cardioproteção. Acreditamos também que em nosso modelo tenha apresentando tido efeitos sobre as espécies reativas de oxigênio, entretanto o foco de nossas análises eram para elucidar se o açaí realmente conseguiria reduzir os danos teciduais causados no músculo cardíaco. Mas, suas contribuições nos ajudarão para a criação de um mecanismo de ação pelo qual o açaí atua para apresentar tais efeitos benéficos ao modelo apresentado.
Agradeço mais uma vez pelas contribuições que servirão para melhorar nosso trabalho. Obrigada
Fabiana Guerra
Novamente, parabéns pelo trabalho e boa sorte nos próximos passos.