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Ensaio de MTT e caracterização molecular
Publicação: 5-FLUOROURACIL CHRONIC EXPOSURE INDUCES MORPHOLOGICAL FEATURES EMT-RELATED IN COLORECTAL CANCER CELLS.
Olá Paola, parabéns pelo trabalho incrível e ótima apresentação! Eu tenho um comentário quanto à análise de viabilidade celular. Meu grupo já teve dificuldades com o ensaio de MTT, que parecia subestimar o efeito do tratamento sendo aplicado, gerando assim valores de IC50 que eram na verdade muito maiores do que a realidade. O ensaio de MTT é altamente dependente do metabolismo mitocondrial (ref: 10.1038/s41598-018-19930-w), que por sua vez é modificado pela aquisição de resistência a quimioterápicos. Ao comparar uma linhagem resistente com a parental, talvez seja interessante validar os resultados do MTT com ensaios que não dependam de metabolismo. Além disso, as suas análises morfológicas são consistentes com a indução do fenótipo de célula-tronco tumoral, que está associado a EMT e também é resistente a drogas. Gostaria de saber se vocês pretendem analisar a expressão de marcadores para células-tronco tumorais e para EMT. Abraços e parabéns de novo!! -
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Próximos passos
Publicação: The role of p53 expression in the glioblastoma microenvironment
Bom dia Leonel! Parabéns pela excelente apresntação! Você poderia me explicar melhor como será realizado os próximos passos? As linhagens de GBM serão cultivadas na presença do sobrenadante da cultura célular primária dos diferentes fenótipos de astrócitos? A invasão será avaliada através de qual ensaio? Transwell? -
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Avaliação
Publicação: The role of p53 expression in the glioblastoma microenvironment
Leonel, first of all, congratulations for your results and video. The project is exciting and has a high potential for translational research. Based on your fibronectin and laminin expression results, some questions arose. TP53-/- astrocytes express the same levels of fibronectin and laminin in the ECM as TP53+/- astrocytes. Thus, the role of TP53 in this context is related to the mutational gain of function or loss of their tumor suppressor function due to lack of p53 expression? Furthermore, are fibronectin and laminin genes (or gene families) TP53 targets? Has the regulation of these genes by TP53 already been presented in other studies? What additional experiment do you suggest to confirm your hypothesis regarding the loss of p53 impacting the fibronectin and laminin expression in the astrocytes ECM? Regards Pedro
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