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Log inINTRODUCTION AND OBJECTIVES: Breast cancer is the second most common type of cancer in the world. Chemotherapy may be the first modality in the treatment of a primary breast tumor and are usually performed with a combination of drugs. However, chemotherapy drugs do not only act on cancer cells, but also on normal cells. This process results in the known side effects of these medications. Natural products are potential sources of novel active molecules that may provide structural template for drug discovery. Bonnetia sp. belonging to the order Malpighiales, a large order of flowering plants that includes 40 families, more than 700 genera and approximately 16.000 species. Studies show that different species within Malpighiales present biological activities, such as antineoplastic, antimicrobial and anti-inflammatory effects. The aim of this study was to investigate the effect of crude extract of fruits of Bonnetia sp. in MDA-MB-231, MCF-7 and 4T1 breast cancer cells. MATERIAL AND METHODS: The viability of MDA-MB-231, MCF-7 and 4T1 cells strain were evaluated by MTT method. The phases of the cell cycle were analyzed in flow cytometry after labeling with RNAse-PI and by the production of reactive oxygen species by flow cytometry after labeling with the DCFDA. RESULTS AND CONCLUSION: Our results demonstrated that the crude extract of Bonnetia sp. fruits after treatment (25, 50, 75, 100 and 200 μg/mL) showed cytotoxicity in MDA-MB-231 and MCF-7 cells at 24 and 48 hours with IC50 of 170.40, 66.77, 115.00 and 177.10 μg/mL, respectively, and in 4T1 cells at 24 and 48 hours with IC50 of 139.20 and 95.30 μg/mL, respectively. The Bonnetia sp. extract increase 16.53-fold the sub-G0/G1 phases of cell cycle after 24 hours of treatment in MDA-MB-231 and decrease 13.58 and increase 17.27-fold the G0/G1 and S phases, respectively, in MCF-7 after 24 hours of treatment. The Bonnetia sp. decrease 38.54-fold the production of reactive oxygen species in MDA-MB-231 cells. In conclusion, our results demonstrated the cytotoxic effect of the crude extract of the fruit of Bonnetia sp. on breast cancer cells, which leads us to suggest it as a candidate for sources of new anti-cancer molecules.
Giselle Pinto de Faria Lopes
Oi Nathalia tudo bem?
Muito legal seu estudo parabéns!!
Quanto ao extrato bruto, vocês já caracterizaram quimicamente? Favoreceu quais grupamentos ao extrair? Tem idéia das classes químicas que poderiam estar dando esse efeito? Queria saber mais sobre o porquê de investir nessa planta em específico. Tem dados na literatura anteiores que mostraram esses efeitos? Quais são os próximos passos?
Att
Giselle Faria Lopes
Eliane Gouvêa de Oliveira-Barros
Oi Nathália, tudo bem?
Primeiramente, parabéns pelo trabalho e pela clareza da sua apresentação no vídeo! Gostaria de aproveitar a oportunidade para entender melhor alguns pontos.
Esse trabalho se propõe a buscar novos candidatos a fármacos a partir de moléculas ativas presentes em produtos naturais para o tratamento do adenocarcinoma de mama, com menos efeitos colaterais ou reações adversas. O efeito do extrato bruto da planta Bonnetia sp (ordem Malpighiales) foi avaliado nas linhagens celulares MDA-MB-231, MCF-7 e 4T1 sendo evidenciado o efeito citotóxico desse extrato bruto.
1 – Agradeço pela resposta bastante completa que você colocou no chat pois ela sanou boa parte das minhas dúvidas.
2 - Gostaria de pedir, por gentileza, que você comente qual o seu envolvimento nos experimentos realizados.
3 – A cultura tridimensional se mostra um dos melhores modelos in vitro para mimetizar o microambiente tumoral. Comparações de culturas de esferoides com culturas em monocamadas demonstram diferenças funcionais em diversas linhagens celulares tumorais. Vocês já pensaram em avaliar os efeitos do extrato em culturas 3D?
Nathalia Alexia Nascimento dos Santos
Oi Eliane. Tudo bem?
Obrigada pelo retorno.Que bom que pude sanar algumas dúvidas com a resposta anterior!
Sim, eu participei de todas as etapas dos experimentos exceto na obtenção do extrato bruto, pois é uma colaboração com o IPPN, então eles fizeram essa parte. Sim, nós já pensamos em avaliar os extratos em cultura 3D. O previsto era começar esse ano a padronizar a metodologia utilizando agarose 1% para a formação dos esferocitos mas em virtude da pandemia tivemos que adiar. Pretendemos fazer essa avaliação sim.
Att, Nathalia Alexia.
Eliane Gouvêa de Oliveira-Barros
Entendo.
Comentário:
Acredito que as análises de citotoxicidade nas células MCF-10A realmente serão enriquecedoras para o seu estudo.
Flavia Vasconcelos
Boa tarde , Nathalia. Meu nome é Flavia e vou avaliar seu pôster. Parabéns pelo seu trabalho. Os questionamentos da Giselle Lopes foram muito interessantes e sua respostas responderam além do que eu gostaria de saber. Parabéns. O teste em células não tumorais é imprescindível para a continuidade do estudo. Gostaria de lhe dar uma dica. Altere a forma de representação dos dados de ciclo celular, pois não favorece seus dados. Talvez usar gráfico do tipo empilhamento. Chamou a minha atenção o alto percentual de células com hiper ploidia em todas as linhagens. Algum comentário na literatura ou foi uma questão de análise? abraços Flavia
Nathalia Alexia Nascimento dos Santos
Olá Flávia. Tudo bem?
Agradeço pelos comentários e dicas.
Podemos sim fazer o gráfico empilhado para melhor representação dos dados do ciclo celular. Obrigada pela observação. Em relação ao aumento de células com hiperploidia tem se discutido na literatura o efeito conhecido como efeito de catástrofe mitótica, que é o que representa os hiperplóides. Porém ainda não vimos nada nessa parte.
Att, Nathalia Alexia.
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Nathalia Alexia Nascimento dos Santos
Oi Giselle! Tudo bem sim.
Que bom que gostou do trabalho, obrigada!
O nosso estudo faz parte de um projeto bioguiado chamado de Projeto I-Flora em colaboração com a professora Lidilhone do Laboratório de Produtos Naturais, IPPN - UFRJ. Esse projeto é de natureza interinstitucional e interdisciplinar e, tem como objetivo inventariar a flora fluminense e agregar valor a sua biodiversidade através de estudos químicos e biológicos. Nós trabalhamos com cerca de 20 extratos brutos de plantas diferentes, ambos colhidos na Serra dos Órgãos - RJ, onde realizamos os experimentos in vitro e selecionamos os extratos com melhores resultados para retornarem ao IPPN para fracionamento e assim isolar e identificar o(s) composto(s) ativo(s). No caso da planta desse estudo - a Bonnetia, ainda não há na literatura estudos com esse gênero. Porém plantas de outras famílias e da mesma ordem Malpighiales, como é o caso da Calophyllaceae, Clusiaceae e Hypericaceae são
conhecidas por produzirem moléculas chamadas de xantonas que possuem atividades biológicas descritas na literatura como anticâncer, antioxidante e antiinflamatória. Então é sugestivo que as plantas da família da Bonnetiaceae também produzam xantonas responsáveis pelos efeitos citotóxicos visto nesse estudo. Nossa perspectiva é de realizar os seguintes experimentos: ROS nas células 4T1 e MCF-7, Morte celular (PI/Anexina-V), Potencial de membrana, Western Blotting e Citotoxicidade em células sadias (MCF-10A).
Att, Nathalia Alexia