Proceedings of Oncobiology Symposiums
Proceedings of XIV Oncobiology Symposium

olá Brenno! tudo bem?

primeiramente, parabéns pelo belo trabalho! uma pena não ter enviado um vídeo curto sobre a sua apresentação... isso ajudou bastante na compreensão a avaliação dos painéis.

gostaria de perguntar como é feita a modulação da expressão de CAR? poderia por favor explicar mais detalhes do seu modelo de sistema artificial? ele é muito interessante e eu fiquei curiosa para saber os detalhes metodologicos.

obrigada!

Olá Bruna, tudo bem? Gostaria de saber mais um pouco da parte biológica do estudo. Porque vocês optaram por escolher linhagem de próstata. 

Uma outra dúvida, ou o que me chamou atenção nas suas figuras, foi os gráficos, em especial comparando a expressão dos marcadores epiteliais e mesenquimais nas células resistentes. NS é não significativo? As barras de expressão, em especial, por estar em log10, me parecem tão distantes para não dar significativo. Entendi certo?

Oi, Thaíssa!

Parabéns pelo trabalho e pela apresentação!

• É possível observar metástase nesse modelo de indução de OSCC com 4 NQO? Se sim, vocês avaliaram se o PCDF reduz a formação de metástase?
• Seria possível pensar na associação do PCDF com o quimioterápico que já é usado no tratamento de pacientes com OSCC? Vocês chegaram a fazer experimentos com essa abordagem?
• Em relação aos animais "4NQO+ PCDF" usados na avaliação da curva de sobrevida, após o término do tratamento com o PCDF o tumor retoma o crescimento rapidamente?

Ola Karina, tudo bem? Primeiramente parabéns pelo trabalho. Gostaria de saber um pouco mais como vocês fazem essa medição da borda do tumor por imagem. São feitas mais de uma medição ao longo do desenvolvimento carcinogênico?

Boa tarde, Anna Carolina.

Parabéns pelo seu trabalho e apresentação dos dados.

O efeito citotóxico das naftoquinonas já foi demonstrado para quais tipos de câncer?

Comparando com estes outros estudos, qual é o grau de citotoxicidade que vocês esperariam encontrar e que seria aceitável para propor como nova droga a ser usada neste tipo de câncer?

Obrigada e sucesso na condução do trabalho.

Abraços

Mariana Emerenciano

https://www.inca.gov.br/pesquisa/pesquisa-clinica/medicina-molecular/estudo-molecular-do-cancer

Olá Diego, obrigada pelo vídeo. Você sabe dizer por que a viabilidade da SW-480 5FUR cai quase que da mesma forma que a parental? Mesmo nas concentrações mais baixas?

Olá Beatriz! Parabéns pelo trabalho! Tenho algumas perguntas rápidas para você.

1 - Há quanto tempo você vem desenvolvendo esse estudo?

2 - Por que vocês optaram por usar um inibidor de autofagia para combinação de tratamento?

3 - Por que vocês optaram pela imunofluorescência para avaliar a expressão de ATG12? Seria esse o melhor método? Ainda, por que avaliar a expressão de ATG12?

Obrigada! 

Olá Mariana, obrigada pela apresentação. Você pretende investigar macrófagos e neutrófilos associados ao tumor (TAMs e TANs) também ou só os linfócitos? E a título de curiosidade, o que caracteriza um cancer de mama precoce de alto risco?  

Olá João. Parabéns a você e aos co-autores por esses resultados bem interessantes. Queria perguntar sua opinião sobre a possível variação inversa de LGR5 entre tecido não-tumoral e tumoral nos animais WT ou KO. Existem alguns indícios que o LGR5 esteja associado de forma geral tanto com células tronco do cólon normal ou tumoral. Como você explicaria a redução de LGR5 nos tumores WT em comparação com o não tumoral, enquanto nos animais KO há um aumento. Acredita que outras vias estejam relacionadas?

Parabéns ao grupo, já pude participar de trabalhos semelhantes e é muito recompensador para todos os envolvidos. Algumas dúvidas:

1 - Qual a idade dos alunos? Foi realizado algum tipo de questionário ou avaliação sobre o que eles conheciam sobre o tema antes e depois da prática?

2 - O grupo chegou com a prática já planejada ou a extração do DNA foi um protocolo que vocês realizaram frente à dúvidas ou vindo de discussão com os alunos? O colégio tem estrutura que permitiria repetir o experimento com outros grupos?

3 - Qual foi a "mensagem" que vocês imaginam que os alunos levaram adiante? Muito obrigado!

Parabéns pelo trabalho!

Por que da escolha de miRNA como marcadores de prognóstico?

No vídeo você comenta sobre "encontrar um novo marcador", quais os já existentes e qual o diferencial da sua proposta?

Quais genes alvos preditos de miRNA-483 e a relação desses genes com Cancer de Ovário?

O miRNA-483 pode oscilar a expressão medinate alterações hormonais, uso de medicação, ...?

Obrigado

Ola, Natália. Parabéns a vocês pelo trabalho. Gostaria de fazer umas perguntas para avaliação. Acho que esse é o canal certo para isso.

1) Considerando que no extrato não apenas haveria a presença do agregado mas como fatores produzidos por linhagens p53 mutada, você diria que o resultado da figura 3 poderia ser interpretado com apenas a presença de outros fatores no meio que não o agregado? Isso por conta to mesmo fenômeno ter sido observado com o extrato e com somente o meio de cultura oriundo da linhagem mutada.

2) Na Fig do WB, a MCF-7 na presença de MDA-MB não teve aumento da detecção de p53, mas apenas na A2780 com OVCAR-3. Contudo, na immuno, foi utilizada a MCF-7 com MDA-MB. Poderia comentar sobre essa escolhar?

3) Qual procedimento utilizado para garantir que o agregado p53 (seja oriundo da MDA-MB ou OVCAR-3) não estava ou livre o meio ou apenas associado à superfície celular?

4) Vocês teriam alguma teoria de como o agregado entra nas células? Não parece depender de contato célula-célula.

5) Seria interessante mostrar que, mesmo na presença de inibidor de p53 selvvagem, a adição de extrato amiloid-like poderia levar ou não ao mesmo fenótipo. Ou, se na ausência de p53 selvagem mesmo que temporariamente, o fenômeno seria atrasado, mostrando que depende da maquinaria de p53 selvagem e que o agregado contribui para criar um fenômeno em cascata.

6) Por fim, qual motivo de não ter usado o extrato na ultima figura e somente o meio condicional?

Eu sugeriria investir na pesquisa de agregados de p53 em microvesículas.

Parabéns aos autores pelo trabalho, bem completo e com muitas possibilidades para os próximos anos. Algumas dúvidas:

1 - Qual a origem, a inspiração para os compostos híbridos? O que se buscou com a hibridização de naftoquinonas e quinolinas, duas estruturas tão importantes para a Química Medicinal?

2 - Mesmo que (eu imagino) não possam mostrar a estrutura ainda, os compostos 12a-c e 13a-c pertencem a uma mesma "série"? Ou o contrário, os compostos 12a e 13a (e daí em diante) apresentam uma mesma substituição na estrutura molecular? Como se chegou ao valor de 50 uM? Para o 13a por exemplo, isso está bem acima do que seria o IC50. E para os demais, já que a "série" 13 parece agir de forma distinta dos compostos 12? 

3 - Um dos controles, a doxorrubicina, tem um padrão naftoquinona na sua estrutura. O outro controle, a antimicina, é um inibidor da fosforilação oxidativa. Ambos aumentam a produção de ROS e levam à quebra do potencial de membrana mitocondrial. O composto 13c agiria nos mesmos alvos desses controles, ou existe a proposta de um mecanismo dual devido à contribuição dos dois grupamentos estruturais presentes na estrutura?

4 - Mesmo que em um experimento piloto, vocês buscaram modular o processo de autofagia antes (ou durante) o tratamento? Rapamicina, cloroquina, bafilomicina, privação de soro... Se não, o que esperariam observar?

Olá Isabelle,

me chamo Pedro Nicolau. Sou PD do INCA e vou avaliar seu trabalho. 

Primeiramente gostaria de falar que gostei do resumo e do poster. mas ficaram algumas dúvidas e queria saber sua opinião.

1 - Você é uma aluna de Iniciação científica. Quanto tempo você trabalhou neste projeto e qual foi seu papel na identificação dos artigos, curadoria dos dados e identificação dos genes/polimorfismos mais relevantes ?

2 - Restringir a pesquisa ao pubmed não criaria um viés de seleção dos trabalhos?

3 - Você informa diferenças na seleção dos controles nos 15 trabalhos incluídos na sua pesquisa. Quais foram as principais concordâncias e discordâncias entre os estudos para selecionar os controle?

4 - Seu critério para selecionar genes/polimorfismos foi estar presente em mais de 1 artigo. Dentre esses alvos associados ao risco de desenvolvimento de endometriose algum estava em todos os trabalhos?

5 - Você relata dados conflitantes entre os trabalho. Ter dado conflitante não caracteriza uma exclusão do alvo como preditor de risco?

Fico no aguardo de suas resposstas. Casos necessário segue meu endereço de email: [email protected]

parabens pelo trabalho.

Pedro

Qual gene da via proposta pelo autor poderia ainda ter sido analisado?

Olá, Caroline!

Também não consegui visualizar o pôster. Espero que consiga resolver o problmema! Olharei mais tarde novamente.

Prezado Luiz Gustavo,

Parabéns ao grupo pelo trabalho. Bem interessantes seus resultados! Duas curiosidades: essa mutação da IDH já foi descrita em outros tumores? A relação inversa entre a presença da mutação da IDH e a expressão de LDH é uma característica específica de gliomas? Vocês fizeram os ensaios de MTT e de exclusão de azul de tripan, mas sabem que via de morte está sendo ativada?

Obrigada!

Atenciosamente,

Danielly Ferraz.

Prezada Caroline,

achei seu resumo super interessante, mas não consigo acessar o poster para ver os resultados. Quando faço download do arquivo, baixo um PDF em branco (pode ter havido algum problema no upload). Você conseguiria entrar em contato com a comissão para saber se pode enviar novamente?

Obrigada!

Atenciosamente,

Danielly Ferraz.

Boa tarde Lucas,

Também o-parabenizo pelo projeto e resultados.

Gostaria de pergunta-lhe:

- como interpreta a redução do tempo de crescimento ao longo das passagens in vivo?

- vc acha que o recurso a animais imunodeficientes pode apresentar limitações? Caso sim, no que pensaria para  superar essas limitaçoes (respondendo por exemplo a criticas de um referee)?

- vcs chegaram a fazer testes mais funcionais, como por exemplo testar o efeito de um quimioterapico ao longo das passagens (in vitro sobre celulas dissociadas ou in vivo)?

Passou o horario das 17h, mas nao se preocupe e responda com calma.

Obrigada!

Olá Isadora, parabéns a você e todo o laboratório pelo trabalho bem interessante. Tenho particular interesse nas proteínas S100 e anexinas, e achei muito interessante o achado da proteína S100A4 diferencialmente presente e associada com a indução da transição epitélio mesenquimal. Gostaria de fazer duas perguntas. Primeiro se vocês encontraram expressão diferencial de alguma das proteínas da família das anexinas. E também quais seriam os próximos passos planejados para esse trabalho?

Parabéns pelo trabalho! Tenho algumas perguntas e vou deixá-las no mesmo tópico para facilitar o processo.

1 - Existe diferença na resposta ao tratamento ou à tumorigênese do glioblastoma relacionada a ter ou não a mutação em IDH? Essa mutação (mutIDH) ou a perda de expressão de LDH tem fator prognóstico?

2 - Você citou que na presença da mutIDH e na ausência de LDH a via alternativa com produção de 2-hidroxiglutarato seria acionada? Nos seus modelos vocês chegaram a avaliar se essa via estaria sendo a via de escolha para o resgate celular que vocês observaram? Quais seriam suas hipóteses de como isso estaria ocorrendo? 

Oi Carlos Luan,

tudo bem? Parabéns pelo estudo! Como você mostrou, esse composto está presente nas amoras. Diante disso, você sabe dizer o rendimento desse composto nesse alimento? Você observou o efeito diretamente nas células. Avaliou em outras células sadias e/ou de outros tipos de tumor? Tem idéia do metabolismo desse composto no organismo? Extrapolando para o tratamento, supondo que esse composto demonstre ação in vivo e modelos subsequentes, como você imagina um produto final? Esse já foi sintetizado?

Prezada Brenda Graziella,

Parabéns pelo trabalho. Ótima estratégia da cultura em 3D com ambas as linhagens.

Pelos resultados mostrados o extrato de chá verde não modificou a viabilidade celular. Gostaria de saber mais detalhes sobre o extrato usado no trabalho se é etanólico ou aquoso? Se trata-se de um extrato total ou se é uma determinada fração? Além disso, sugiro utilizar outro método para avaliação da viabilidade celular. Se as células estiverem entrando em apoptose você não irá detectar pelo método utilizado.

Obrigada, Juliana Echevarria Lima

Diego, parabens pelo trabalho!

- Vc poderia re-explicar a razao pela qual nao ve diferenças de viabilidade celular entre as linhagens, mas sim uma diferença de IC50?

Obrigada!

Os autores concluem "Ouabain acts as an immunomodulation and improves the survival of animals with melanoma only in the intraperitoneally injected pre-treated protocol".
Qual a sobrevida dos camundongos que receberam o pré-tratamento de ouabaína no protocolo subcutâneo de implantação das células B16F10? E a sobrevida dos camundongos que foram tratados com ouabaína após o estabelecimento do tumor nos protocolos i.p. e s.c.?

O uso de inibidores de checkpoint imunológicos (anti-CTLA4, anti-PD-1 e anti-PD-L1) ganharam grande relevância na terapia antineoplásica, por inibirem esses "freios" imunológicos, estimulando a resposta imune anti-tumoral mediada por linfócitos T.
Uma vez que a ouabaína inibe as funções de linfócitos B e Treg, qual o efeito desse composto sobre outras células imunes, em especial linfócitos T CD8 e Th1?
 

Olá, Mariana!

Parabéns pelo trabalho! Seus dados são muito empolgantes!!

Qual é o principal sítio de metástase do melanoma acral? Você tem informações sobre os pacientes que já apresentavam metástase ao diagóstico? Poderia ser uma informação interessante para buscar associação de pega e não pega do enxerto.

Você acredita que, com um número amostral maior, poderia haver diferença na taxa de crescimento entre amostras primárias e metastáticas?

Você chegou a avaliar a relação dos parâmetros histológicos (figura 5) com pega e não pega do enxerto?

Prezada Michelle,

parabéns pelo trabalho! Gostaria de saber por qual método vocês desenvolvem a cultura tridimensional de MDA-MB-231 (considerando que essa é uma linhagem que não costuma formar espontâneamente esferoides bem delimitados como os das imagens). Além disso, as atividades enzimáticas (PFK e PK) só foram medidas após 48h de exposição? Qual a explicação para que o efeito tenha sido observado após esse período e não mais precocemente?

Obrigada!

Atenciosamente,

Danielly Ferraz.

Como os autores conciliam o aumento da proliferação das células transfectadas com TOB2 e a redução da expressão de c-Myc, uma vez que c-Myc é um oncogene associado à transformação celular e proliferação?

Como os autores explicam a dissonância entre o ensaio de proliferação celular por cristal violeta e a contagem total de células?

Como os autores conciliam os dados de expressão basal de TOB2 da figura 1C com os das figuras 2B/C/D? Na figura 1C, células HEK293T apresentam a menor expressão proteica de TOB2 entre as linhagens do painel testado e já na figura 2D, estas mesmas células transfectadas com o vetor vazio apresentam uma banda de TOB2 considerável no WB.

Olá Natascha, parabens pela apresentação. Me chamo Pedro Nicolau, sou pos-doc do INCA e farei a avaliação do seu trabalho e darei algumas sugestões:

1 - Há quanto tempo você trabalha nesse projeto? Qual seu papel no design do projeto e na realização dos experimentos? 

2 - Com relação ao trabalho com as linhagens acho interessante saber o perfil de expressão desses genes nelas para poder traçar novas estratégias de estudo. Entretanto, a comparação do perfil de expressão entre uma linhagem de OSCC e uma de queratinócitos, por sí só, me parece uma análise superficial. Assim, quero saber quantas reblicatas biológicas e experimentais foram analisadas? Há a previsão de análises in vitro com a modulação da expressão destes genes?

3 - A Cancer Cell line encyclopedia pode ser uma ferramenta a ser utilizada para ajudar a identificar o perfil de expresão destes genes em um conjunto de linhagens celulares de OSCC

4 - Sugiro nas proximas apresentações conferir com mais rigor os genesymbols para evitar errinhos que tiram um pouco o brilho do trabalho.

5 - As amostras humanas são pareadas? Se sim, eu não chamaria as amostras não tumorais de saudáveis por causa do conceito de campo de cancerização. Você poderia me explicar esse conceito?

6 - Houve correlação de expressão entre os genes? Inclusive PIK3CA e AKT1 são conhecidos parceiros envolvidos em diversos processos biológicos

7 - o cBioportal é um software free e fácil de usar, ótimo para analisar dados do TCGA. Isso daria um peso maneiro ao trabalho e você poderia comparar a associação da expressão gênica com as características clinicopatológicas em outras populações.

8 - Uma pena que poucas amostras humanas foram analisadas até o momento. Senti falta de um número de amostras maior para ver se estatísticamente essas projeções de superepressão ou subexpressão são verdadeiras. Com isso, porque 20 pares de amostras? de onde surgiu esse número?

Fico no aguardo de suas respostas. 

Pedro Nicolau 

[email protected]     

Olá Emmanuel, parabéns pelo trabalho, muito interessante. Gostaria de te fazer algumas perguntas. Você observou morte celular ou mesmo indicadores de UPR no seu sistema? O que poderia explicar a queda de expressão em alguns casos e manutenção de níveis mais altos de expressão de em outros casos?

Parabéns pelo trabalho, tão bem elaborado e exposto.

Gostaria de fazer mais uma pergunta, vocês pretendem expandir este estudo, talvez em linhagens de LLA-T ou LMA com KMT2A-AFF1, você acha que poderia encontrar alguma diferença nesses subtipos para os mesmos experimentos ou você acha que isso seria irrelevante?

Os autores concluem "These promising results suggest that the styryl-mesoionic derivatives may be useful in the future for chemotherapeutic treatment of leukemias/lymphomas infected with the HTLV virus."
Entretanto, a linhagem celular Jurkat (não infectada pelo HTLV) é tão sensível aos compostos mesoiônicos quanto às demais células testadas. Existe, de fato, algum mecanismo ou evidência que demonstre essa seletividade por células infectadas por HTLV? Os autores já testaram esses compostos em outros tipos tumorais e linhagens não-tumorais?

Os dados de sobrevida são bem expressivos. 

Vocês conseguem fazer as análises categorizando os pacientes pelo estadio?