Determinação de caseína em açaí: validação de método e estimativa da incerteza de medição

A alergia ao leite é uma das reações alimentares adversas mais prevalentes, representando um risco relevante à saúde pública. A ingestão acidental de traços de leite pode desencadear reações graves em indivíduos sensibilizados, exigindo métodos analíticos sensíveis, específicos e confiáveis para sua detecção. A validação desses métodos é essencial, sobretudo em matrizes alimentares complexas, com alto risco de contaminação cruzada e de relevância comercial, como o açaí. Conforme a RDC 512/2021/ANVISA, métodos utilizados na análise de produtos sujeitos à vigilância sanitária devem ser verificados ou validados nas condições de uso, demonstrando sua adequação ao propósito. Este estudo teve como objetivo validar um método imunoenzimático (ELISA, R-Biopharm^® R4612) para quantificação de caseína em açaí congelado, alimento naturalmente isento de ingredientes lácteos, visando à ampliação do escopo analítico do Laboratório Central de Saúde Pública de Minas Gerais (LACEN-MG) para avaliação da conformidade da rotulagem de alérgenos, conforme RDC 727/2022/ANVISA. Foi utilizada uma amostra comercial de açaí sem declaração de leite ou derivados no rótulo, cuja ausência de proteínas lácteas foi previamente confirmada. As amostras foram então fortificadas com solução padrão de caseína (NIST 1549A), nos níveis de 5,0; 25,0 e 50,0 mg/kg, além do branco, sendo analisadas em 16 replicatas independentes por concentração, em duas baterias analíticas distintas. Foram avaliados os critérios de desempenho: seletividade, limites de detecção (LD) e quantificação (LQ), precisão (repetibilidade e intermediária) e recuperação, conforme os requisitos estabelecidos no documento: AOAC SMPR^® 2018.003. A incerteza de medição expandida foi estimada considerando como fontes a precisão intermediária, a calibração e a resolução dos equipamentos utilizados (balança, leitora ELISA e pipetadores). Os dados foram previamente analisados quanto à normalidade, homogeneidade da variância e presença de outliers. Foram obtidos resultados satisfatórios para todos os parâmetros avaliados. O método se mostrou seletivo para a matriz açaí. O LD e o LQ foram estimados em 0,8 mg/kg e 4,3 mg/kg, respectivamente (critério: ≤10 mg/Kg). As recuperações variaram de 58% a 74% (critério: 50–150%). A precisão variou entre 11% e 20% (repetibilidade) e entre 8% e 20% (precisão intermediária), atendendo aos limites aceitáveis (≤20% e ≤30%, respectivamente). A incerteza expandida relativa variou entre 8% e 14%, sendo a precisão intermediária a principal fonte de contribuição. O método validado mostrou-se adequado para a determinação de caseína em açaí, possibilitando sua aplicação no monitoramento do alérgeno leite e na verificação da conformidade da rotulagem, contribuindo assim para a proteção do consumidor alérgico.