As Microalgas Chlorella vulgaris e Scenedesmus obliquus são microrganismos fotossintetizantes, que crescem em condições mixotróficas em meios de cultivo alternativos. A adição de fontes de carbono orgânico ao meio de cultura pode proporcionar altos valores de concentrações celulares com grande valor biotecnológico. O soro de queijo é um sub-produto agroindustrial rico em lactose com potencial para o desenvolvimento de microalgas. O objetivo do trabalho foi avaliar a composição bioquímica e a atividade da enzima β-galactosidase produzida pelas microalgas cultivadas em soro de queijo. Para realização do experimento, as microalgas foram cultivadas em meio padrão Bold’s Basal, com intensidade luminosa de 4000 lux com fotoperíodo de 12/12h e aeração constante. O cultivo mixotrófico foi com soro de queijo 5% a 25ºC durante cinco dias de fermentação. Para determinação da composição bioquímica foram determinadas a lactose pelo método da metilamina, proteínas pelo método de Lowry e cinzas conforme método da AOAC (1995). As análises da atividade enzimática (β-galactosidase) foram determinadas utilizando a técnica colorimétrica ONPG (Sigma-N1127) e glicose oxidase (Laborclin-743121). Chorella vulgaris apresentou 0,682 mg/mL de lactose, 0,003 mg/mL de proteína, 0,50 g/L de cinzas e uma atividade enzimática de 0,750 U/mL. Em Scenedesmus obliquus apresentou, 1,02 mg/mL de lactose, 0,002 mg/mL de proteína, 0,24 g/L de cinzas com uma atividade enzimática de 0,149 U/mL. No teste da hidrólise da lactose não foram encontrados resultados para ambas as microalgas. Chlorella vulgaris, apresentou maior concentração bioquímica em relação à Scenedesmus obliquus, porem, esta mostrou maior atividade da enzima β-galactosidase. No entanto, há necessidade de outros experimentos a fim de obter uma condição ideal para a obtenção da β-galactosidase com alta atividade enzimática.