Este estudo objetivou verificar a origem da água utilizada no lactário de um hospital universitário de Cuiabá, MT, e se a mesma está em acordo ao padrão de potabilidade preconizado na portaria nº 518/2004 do Ministério da Saúde, quanto à ausência de coliformes totais e termotolerantes ou Escherichia coli em 100 mL de água. Para tanto, foram coletadas aleatoriamente 48 amostras de aproximadamente 250 mL de água, de 01/2011 a 12/2012. Embebeu-se 100 mL numa cartela de colipaper®, incubada a 36 ºC por 20 horas, posteriormente a presença de pontos azuis e vermelhos representava coliformes totais, somente pontos azuis coliformes fecais e quando verde Salmonella sp. As amostras analisadas foram originárias da rede de tratamento e de fontes minerais, sendo classificadas em água de torneira (AT), quando filtrada e fervida (ATFiFe), e água mineral (AM) quando fervida (AMFe). Das 48 amostras 41,6% foram denominadas como AT e destas somente 3 (15%) como ATFiFe, já as 58,3% restante receberam a denominação de AM sendo que destas 20 (71,42%) como AMFe. Dentre as 48 amostras analisadas, 7(14,6%), estavam contaminadas com coliformes totais e termotolerantes, sendo que 28,6% (2/7) AT, 42,8% (3/7) AM e 28,6% (2/7) AMFe. A água utilizada no lactário é originária da rede publica de tratamento e de fontes minerais, consumidas in natura e também submetidas aos processos de filtração e fervura. A ocorrência destes grupos de microrganismos em água as classifica em não potável, e isto é preocupante principalmente no ambiente hospitalar.