A microfluídica tem sido explorada em aplicações variadas no desenvolvimento de bioprocessos através da manipulação de pequenas quantidades de fluidos. Paralelamente, a terapia gênica tem se mostrado uma alternativa eficaz para o tratamento e vacinação de determinadas doenças não antes tratáveis. A convergência dessas tecnologias tem se mostrado uma alternativa promissora para o desenvolvimento de processos para a produção de veículos carreadores de DNA baseados em nanopartículas lipídicas, i.e. lipoplexos. Processos microfluídicos permitem a formação de lipoplexos com características mais apropriadas para aplicações em terapia gênica que aqueles produzidos por processos tradicionais “bulk”. Neste contexto, o objetivo desse trabalho foi de desenvolver um processo microfluídico para a produção de lipoplexos com características físico-químicas adequadas para aplicações em terapia gênica. Utilizando um dispositivo microfluídico de focalização hidrodinâmica, foi possível obter agregados com diâmetro de partícula em escala nanométrica e carga superficial positiva. A faixa de valores da razão entre as taxas de fluxos (FRR) lateriais e central que produziram complexos com melhores resultados de polidispersidade foi de 10 a 16; enquanto a melhor condição de concentração lipídica da fase alcoólica (Clip) foi de 12,5 mM. O diâmetro hidrodinâmico de partícula diminuiu com o aumento do fluxo total de escoamento (Qtotal), o que indica que a área de difusão entre as espécies afeta a organização coloidal dos agregados. Em suma, foi possível produzir lipoplexos baseados em nanopartículas lipídicas com características físico-químicas adequadas para futuras aplicações farmacêuticas na área de terapia gênica.