Streptococcus pneumoniae é causa de doenças como pneumonia, otite, sinusite, meningite e sepse. Devido ao grande número de sorotipos da bactéria, cada um deles com um polissacarídeo capsular diferente e cuja distribuição na população varia, as vacinas hoje disponíveis têm cobertura limitada além de estar ocorrendo substituição de sorotipos na população por outros não presentes nas vacinas. Visando reduzir o custo e aumentar a cobertura, têm-se estudado vacinas baseadas em proteínas que ofereceriam proteção independente de sorotipo. Dentre elas, a proteína de superfície do pneumococo (PspA) e a pneumolisina geneticamente destoxificada (PdT) mostraram resultados promissores em modelos de sepse e a utilização dessas duas proteínas fusionadas apresentou maior potencial protetor contra desafio sistêmico em camundongos. Desta forma, o objetivo deste trabalho consistiu em produzir em E. coli uma proteína híbrida de composta de PspA94 e PdT, o que traria a vantagem de produzir dois antígenos em um único processo, para utilização em uma nova vacina proteica antipneumocócica e assim oferecer proteção independente do sorotipo. Para conferir estabilidade à molécula, o gene do híbrido foi clonado com um espaçador molecular rígido entre as proteínas através da técnica de overlap extension PCR. A sequência do gene foi checada através de mapa de restrição e sequenciamento. O gene da proteína foi expresso em E. coli BL21 Star (DE3)pLysS e a proteína obtida foi reconhecida por anticorpos produzidos contra a célula inteira de pneumococo através de Western Blot.