O interesse pelo uso de bioprocessos na fabricação de combustíveis e produtos químicos tem crescido, em larga medida, em razão de suas reivindicações ecológicas. Nesse contexto, este trabalho apresenta uma avaliação ambiental comparativa do cultivo de E. coli em diferentes fontes de carbono – xilose, glicose, glicerol e sorbitol – em batelada, a 20 g/L, visando à produção de rEnzimas utilizadas em processos de conversão de biomassa lignocelulósica. Empregando a metodologia de (Heinzle et al. 2007), conclui-se que o glicerol e a xilose apresentam menor impacto ambiental que a glicose e o sorbitol, sobretudo devido a seus fatores de conversão de substrato a biomassa elevados (xilose: 0,67 g/g; glicerol: 0,72 g/g). Observa-se ainda que a maior parte do impactos ambientais identificados está relacionada aos compostos nitrogenados e fosforados, usados em todos os cultivos realizados.