Efeitos da exposição à fipronil (regent® 800 wg) sobre a anatomia esquelética de Scinax fuscovarius (Hylidae) durante o desenvolvimento larval

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Detalhes
  • Tipo de apresentação: Pôster
  • Eixo temático: Anatomia comparada
  • Palavras chaves: Anuros; fipronil; Sistema esquelético;

Autoras(es):

  • 1 Universidade Estadual Paulista

Efeitos da exposição à fipronil (regent® 800 wg) sobre a anatomia esquelética de Scinax fuscovarius (Hylidae) durante o desenvolvimento larval

Gabriel da Cunha Canevari

Universidade Estadual Paulista

Resumo

O uso excessivo de agrotóxicos para melhorar a produção de alimentos é um método muito usado na agricultura, tendo como risco o transporte de compostos para ambientes aquáticos prejudicando a biota local, como o inseticida Fipronil que vem gerando muito interesse por seus efeitos em vertebrados serem pouco conhecidos. Nesse contexto, as larvas de anuros por serem aquáticas e terem órgãos que as protegeriam ainda em formação, são muito sensíveis a contaminação por agrotóxicos. Ademais, alguns inseticidas podem afetar a formação do sistema esquelético dessas, prejudicando na fuga de predadores, alimentação e reprodução. Assim, devido ao potencial risco dos anuros em ambientes agrícolas terem seu fitness comprometido por contaminantes, objetivamos a investigação dos efeitos de Fipronil sobre o sistema esquelético de Scinax fuscovarius. Para isso, utilizamos 48 girinos no estádio 25 (Gosner, 1960) em quatro grupos experimentais (Controle; 0.04mg/L; 0.08mg/L e 0.4mg/L), com três réplicas cada. Foram colocados quatro indivíduos em cada recipiente com quatro litros d’água declorada a temperatura ambiente. Os animais que chegaram ao estádio 46 foram eutanaziados em benzocaína 5g/L, fixados em formol 10%, desidratados em serie alcoólica, diafanizados e imagens do dorso, ventre e membro locomotores foram capturadas e analisadas em busca por anomalias, sendo feitas medidas do comprimento do corpo, dos ossos longos e da largura das epífises e diáfises. Utilizou-se um teste multifatorial com confiança de 95% pelo software R. Não foram observadas anomalias e alterações no comprimento do corpo, dos ossos longos e na espessura das epífises e diáfises. Dessa forma, nas concentrações de Fipronil testadas, não houve efeitos estruturais negativos sobre o sistema esquelético de S. fuscovarius.

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Autor

Gabriel da Cunha Canevari

Olá Lorena, tudo bem? Primeiramente muito obrigado pelos elogios!

De fato, eu também acho que a histologia dos ossos pode gerar outros dados muito interessantes, e é uma das outras análises que irei realizar!

O processo de diafanização, que foi realizado nos animais no estádio 46 Gosner que são imagos e não girinos, foi realizada adaptando o procedimento estabelecido por William R. Taylor & George C. Van Dyke no artigo intitulado: "Revised procedures for staining and clearing small fishes and other vertebrates for bone and cartilage study". 

Dessa forma, após a desidratação em série alcoólica, os animais foram submetidos a uma solução de Azul de Alcian para que as cartilagens fossem coradas, seguida pela neutralização em borato de sódio. Depois, os espécimes foram colocados em uma solução de Pancreatina para que os tecidos moles e mais esternos fossem digeridos permitindo a visualização dos ossos e cartilagens. Após esse processo, os espécimes forma submetidos a uma solução de Vermelho de alizarina e KOH para a coloração dos ossos, sendo então encaminhados novamente para a enzima para que qualquer outro tecido mole (musculatura) que pudesse ter sobrado ser digerido para facilitar mais a visualização dos ossos e cartilagens. Por fim, o material foi submetido a uma exposição seriada de solução de glicerina e KOH até glicerina pura onde foram preservados para a análise.

Espero ter conseguido responder sua pergunta! Qualquer outra dúvida é só me avisar aqui!

Autor

Gabriel da Cunha Canevari

Olá Grazyelle, tudo bem? Espero que sim! 

Primeiramente obrigado pelo elogio e por ter assistido a minha apresentação.

No meu projeto, não realizei exatamente uma CL 50, mas sim uma avalição de mortalidade. Digo não ser uma CL 50 pois o intuito não foi avaliar qual era a concentração mínima que levasse a óbito 50% da população, mas sim avaliar se uma das três concentrações avaliadas geraria efeito negativo sobre a sobrevivência dos animais. Com isso, observamos que os animais dessa espécie quando expostos a maior concentração testada nesse experimento (0,4mg/L), tiveram óbito de mais de 50% da população do grupo, porém como não avaliei outras concentrações menores que 0,4mg/L, não posso afirma que essa concentração é a CL 50, apenas que apresentou efeito negativo sobre a sobrevivência dos indivíduos dessa espécie. Mas esse resultados nos deixou instigados e provavelmente faremos um novo experimento mais para frente visando descobrir a CL50 de Fipronil para essa espécie.

De fato, uma das possibilidades para a falta de resposta na morfometria dos ossos longos são as concentrações, porém ainda estamos avaliando outros fatores no esqueleto para ter uma melhor noção dos efeitos do Fipronil, como análises histológicas e do grau de ossificação. As concentrações baseadas no CONAMA são bem baixas porém muito próximas da menor concentração utilizada no nosso trabalho. Assim a ideia foi pegar uma concentração próxima da ambientalmente relevante (que é bem baixa), o dobro dela e então 10 vezes mais, dai as três concentrações que foram utilizadas em nosso trabalho (0,04ml/L; 0,08ml/L e 0,4mg/L).

Assim como você disse, nós também pensamos que outros órgãos poderiam nos trazer respostas e até colaborar com as análises osteológica. É importante ressaltar que essas analises ósseas são apenas uma parte do nosso trabalho (meu mestrado). Estamos avaliando também a genotoxicidade eritrocitária; a hepatotoxicidade; e a Histopatologia da tireoide, análises que ainda estamos realizando!

 

Espero ter esclarecido qualquer dúvida que tenha surgido! Muito obrigado novamente por ter assistido e comentado! Caso tenha mais alguma sugestão ou dúvida, é só me chamar aqui!