Os Efeitos Fotodinâmicos do Azure B Danificam Lipídeos e Proteínas Mitocondriais

Introdução: O azure B (AB) é uma molécula que apresenta alto potencial como fotossensibilizador para aplicação na Terapia Fotodinâmica (TFD). Essa técnica baseia-se em reações fotoquímicas, nas quais moléculas fotoativadas com uma fonte luminosa específica geram espécies reativas de oxigênio (EROs), as quais podem danificar diversas biomoléculas e levar à morte celular. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar as ações do AB sobre marcadores lipídicos e proteicos do estresse oxidativo em mitocôndrias isoladas e, assim, responder se a organela pode ser um sítio de atuação relacionado ao efeito fotodinâmico gerado por esta droga. Materiais e Métodos: Foram utilizados ratos machos Wistar (180─220 g), submetidos à eutanásia por métodos aprovados pelo CONCEA. Mitocôndrias hepáticas foram isoladas por centrifugação diferencial. Após, foram pré-incubadas durante 10 min na presença ou ausência de 40 μM de AB e irradiadas com um sistema de diodo emissor de luz vermelha (636 nm, 2,6 mW  cm2), fornecendo, portanto, uma dose de energia total de fótons (fluência) de 1,6 J  cm-2. Após este período, o conteúdo de proteínas carboniladas (PC) foi determinado pela formação de grupos carbonila, utilizando o coeficiente de absorção molar de hidrazonas alifáticas a 370 nm e expresso em nmol  mg de proteína-1. O teor de lipoperóxidos foi determinado pelo método TBARS (do inglês: Thiobarbituric acid reactive substances), pela quantidade de malondialdeído (MDA) formado. O MDA reage com ácido tiobarbitúrico (TBA), e pode ser dosado espectrofotometricamente a 532 nm. Neste caso, os valores também foram expressos como nmol  mg de proteína-1. Resultados: Na ausência de irradiação, não foram observadas diferenças estatisticamente significativas no conteúdo de PC entre mitocôndrias incubadas na presença ou na ausência do AB. Sob irradiação, no entanto, foi possível observar que o conteúdo de PC aumentou significativamente em relação ao controle (+123,6%). Sob influência do AB, os níveis de peroxidação lipídica, por outro lado, aumentaram tanto na ausência como na presença de irradiação. Os aumentos atingiram valores de 55,9% na ausência de irradiação e 90,7% na presença de irradiação. Conclusões: Os resultados indicam que o efeito fotodinâmico gerado pelo AB (40 μM) causa estresse oxidativo de forma aguda (irradiação por 10 min), danificando lipídeos e proteínas em mitocôndrias isoladas. Dessa forma, o AB parece ser uma molécula promissora para uso na TFD e a mitocôndria pode ser considerada um importante alvo. No entanto, cabe enfatizar que o AB induziu a peroxidação lipídica na ausência de irradiação, o que contradiz um dos principais preceitos da TFD, isto é, um fotossensibilizador ideal não deve ser tóxico na ausência de irradiação (no escuro). Não se pode excluir, desta forma, que tal efeito relacione-se com possíveis efeitos colaterais quando do uso clínico desta molécula.