Microdispositivos Enzimáticos para Determinação Amperométrica de Peróxido de Hidrogênio em Mel

A inserção de sistemas miniaturizados, μ-TAS, vêm tendo um aumento significativo em análises químicas, onde acontece a integração de etapas analíticas pertinentes ao processo. Destacam-se na utilização de μ-TAS o sistema miniaturizado em fluxo (μ-FIA), com detecção eletroquímica, amperométrica e espectrofotométrica. Neste trabalho propomos a construção e aplicação de um microdispositivo enzimático para a quantificação de glicose em amostras de mel. O método analítico é baseado na oxidação biocatalítica da glicose em H2O2e ácido glucônico por meio da enzima glucose oxidase (GOx). A eficiência do microdispositivo foi avaliada por detecção amperométrica (+0,60 V) do H2O2. GOx foi eficientemente imobilizada sobre microcanais poliméricos de poli(metilmetacrilato) (PMMA). A imobilização foi feita por meio dafuncionalização do PMMA com polietilenoimina (PEI) e, em seguida, pela passagem de uma solução de glutaraldeído e GOx. O primeiro processo foi realizado por meio de banho ultrassônico por 20 min, a 70ºC, em uma solução 5% m/m de PEI em dimetilsulfóxido. O segundo processo foi realizadopassando pelo microdispositivo uma solução contendo 100 U de GOx e 0,1% (v/v) de glutaraldeído em tampão fosfato 0,10 mol L-1(pH 7,0) durante 1 hora. As medidas amperométricas foram realizadas usando um sistema FIA com uma bomba peristáltica, um potenciostato da μ-Autolab e uma microcélula eletroquímica em PMMA desenvolvida e construída no laboratório, na qual foram usados como eletrodos de trabalho platina, de referência Ag/AgCl(sat) e auxiliar de platina. A avaliação da bioconversão do dispositivo foi feito pelo estudo da vazão, com valor ótimo em 125 μL min-1, usando um volume de injeção de 30 μL. A curva analítica mostrou proporcionalidadeentre ioxidaçãoe Cglicosepara sucessivas injeções do analito na faixa de 100 μmol L-1a 2,00 mmol L-1, com uma equação linear i(A) = 1,97x10-9+ 1,91x10-7Cglicose(mmol L-1), um coeficiente de correlação de 0,994 e limites de detecção e quantificação de 5,78 e 17,3 μg g-1, respectivamente. As concentrações de glicose nas amostras de mel variaram de 113,1 a 231,1 mg g-1.