Avaliação do Impacto do Solvente, Sequência de Pulso e Número de Scans no Limite de Quantificação do Cloridrato de Bupropiona no FT-RMN 1.88T.

A Ressonância Magnética Nuclear Quantitativa (RMNq) é uma técnica difundida em laboratórios especializados que, desde seu princípio, ganhou notoriedade em suas possíveis aplicações no controle de qualidade farmacológico, visto a possibilidade de confirmação estrutural e quantificação resultantes de uma mesma técnica e com rápida aquisição frente aos métodos cromatográficos. Por outro lado, o uso de criogênicos e solventes deuterados, que tornam a manutenção do equipamento e preparo de amostras custosos, ainda são compreendidos como obstáculos, mas que podem ser superados com o uso dos chamados RMN de baixo campo, ou de bancada. Entretanto, a intensidade do campo magnético mais baixa gera dúvidas a respeito da capacidade de quantificação dos equipamentos de bancada. Compreendendo o interesse da aproximação do RMNq de bancada ao controle de qualidade de medicamentos e o interesse na investigação de parâmetros de preparo de amostra e aquisição de espectros, tal qual a superação do afastamento entre a RMNq e métodos de investigação quimiométricos acerca da técnica, o presente trabalho apresenta os resultados de um Planejamento Fatorial 2³ utilizando como variáveis (níveis): Sequência de Pulso (SP) – zg (-1) e zgpr (+1); Solvente (S) – D₂O (-1) e H₂O (+1); Número de Scans (NS) – 10 (-1) e 20 (+1), para avaliar quais afetam o Limite de Quantificação (LQ) utilizando um RMN de 1,88 T. O analito escolhido foi o cloridrato de bupropiona (C₁₃H₁₈ClNO; M= 239,74 g/mol) um antidepressivo cujo controle de qualidade não consta na farmacopeia brasileira e apresenta três sinais isolados, em 5,22 ppm (q, ³J = 7,2, 1H); 1,64 ppm (d, ³J = 7,2 Hz, 3H); e em 1,38 ppm (s, 9H); sendo o último escolhido para a realização dos cálculos da resposta do planejamento. Para garantir a relaxação completa dos núcleos de ¹H responsáveis pelo sinal escolhido, foi realizado o cálculo do tempo de relaxação (T1) a partir do tratamento de 14 pontos adquiridos com a SP t1ir, chegando a um valor de T1 = 0,558 s, e, portanto, para aquisição dos espectros quantitativos, utilizou-se 7T1 = 3,906 s. O pulso de 90° foi calibrado em 11,71 μs para garantir a maior precisão possível em relação ao ângulo de excitação do sinal. As amostras foram preparadas em triplicata, abrangendo 9 concentrações diferentes (7,36, 6,84, 6,31, 5,79, 5,26, 4,73, 4,21, 3,68 e 3,16 mg) em 600 μL de solvente. Considerando a dependência linear entre concentração (C) e área do sinal (Int), as curvas de calibração foram plotadas C x Int e então se determinou LQ = 10*α/b, o qual α – média do resíduo da curva e b – coeficiente angular da curva. Todas as curvas apresentaram R² entre 0,960 e 0,995, indicando linearidade em todas as condições de aquisição. Os LQ médios obtidos variaram de 1,98 μg (zg; H₂O; 10) à 7,89 μg (zg; D₂O; 20). Em relação aos efeitos de primeira ordem, NS apresentou efeito positivo (LQ aumenta com o aumento do número de scans), indicando que erros ou problemas no processo de aquisição dos scans podem estar se somando, enquanto o S apresentou efeito negativo, ou seja, o uso de H₂O foi responsável pela redução do LQ. Dos efeitos de segunda ordem, o único significativo foi SPxNS, com efeito negativo, indicando que a associação entre D₂O e zgpr é responsável por uma redução no LQ, assim como esperado, diminuindo o sinal da água no espectro e intensificando o sinal do analito. O comportamento atípico de um efeito de segunda ordem envolvendo NS, sem a presença de um efeito de primeira ordem para tal, soma-se à existência de um efeito de terceira ordem SPxSxNS positivo, indicando interdependência entre todas as variáveis, sugerindo um aumento do LQ das condições (-1, -1, -1) para (+1, +1, +1), que foi obtido de fato na realização do planejamento. O ponto de menor LQ (melhor resultado) obtido nesse planejamento, então, foi (-1, +1, -1) ou (zg, H₂O, 10) o experimento mais rápido e com preparo de amostra mais simples. No entanto, o comportamento anormal de efeitos de segunda e terceira ordem presentes relacionados à variável SP ausente em primeira ordem leva à possibilidade da desconsideração do efeito de variáveis não incluídas no estudo, tais como o tempo de shimming realizado e o controle da temperatura durante a aquisição.