OTIMIZAÇÃO MULTIVARIADA DE UM MÉTODO DE QUANTIFICAÇÃO DE FITOCANABINOIDES EM EXTRATOS MEDICINAIS DE CANNABIS POR UHPLC-HRMS/MS

A Cannabis é uma espécie de planta altamente diversa, complexa e polimórfica, conhecida pela capacidade de biossíntese de uma extensa variedade de metabólitos [1]. O potencial psicoativo da Cannabis já é conhecido historicamente e a busca por seu aproveitamento terapêutico se encontra em expansão, principalmente na forma de extratos oleosos medicinais [1,2]. Conforme avanços judiciais ocorrem quanto a sua regulamentação, métodos de avaliação de risco e de controle de qualidade têm sido desenvolvidos e padronizados [2]. No que tange os principais grupos-alvo e o controle de qualidade, destaca-se a identificação e quantificação de fitocanabinoides, o principal grupo de metabólitos de propriedades terapêuticas desta matriz vegetal [1,2]. Por isso, o objetivo do trabalho é desenvolver um método analítico otimizado para quantificação de tetrahidrocanabinol (THC), canabidiol (CBD) e canabinol (CBN) em extratos oleosos de Cannabis por cromatografia líquída de ultra eficiência acoplada a espectrometria de massa de alta resolução em tandem (UHPLC-HRMS/MS). Como primeira etapa, os parâmetros instrumentais da fonte de ionização por electrospray foram otimizados seguindo um planejamento do tipo Plackett-Burman para sete variáveis com a finalidade de reduzir o coeficiente de variação (CV) obtido para a razão área do analito/área do padrão interno (PI). Nesta etapa, além da otimização, uma avaliação criteriosa do PI foi realizada mediante as opções disponíveis (THC-COOH-D9 e THC-COOH-D3). O resultado apresentado através de um dos experimentos considerados no planejamento se mostrou satisfatório (5%, 5% e 8% para THC, CBD e CBN, respectivamente, com THC-COOH-D9 como PI) e as condições foram empregadas para os ensaios consecutivos. O método de preparo foi otimizado seguindo um planejamento fatorial completo 23 para identificação dos parâmetros significativos na extração líquido-líquido com metanol:hexano (9:1) de 100 mg de óleos de coco e gergelim fortificados com os analitos e PI. As variáveis volume de solvente (V1), tempo de agitação em agitador automático (V2) e tempo de extração por ultrassom (V3) se apresentaram significativas e todas foram mantidas para modelagem por Doehlert. A partir das condições otimizadas, o método será validado de acordo com os parâmetros descritos no guia de validação da ANVISA RDC 166, o qual será aplicado posteriormente à quantificação de amostras de óleos administrados a humanos e a cães.