Preliminary Characterization of an Inhibitor Peptide of Angiotensin-Converting Enzyme from Acanthoscurria geniculata Venom

O veneno de tarântula é um coquetel de compostos bioativos com uma diversidade de alvos moleculares e funções. Essas misturas são contidas principalmente por enzimas e toxinas peptídicas. Predominantemente de diferentes venenos de serpentes, vários peptídeos potencializadores de bradicinina (BPP) foram isolados, os quais possuem também atividade inibitória da enzima conversora de angiotensina (ECA). A ECA desempenha um papel fundamental no sistema renina-angiotensina, que regula a pressão arterial e o equilíbrio hídrico em abundância. Numerosos peptídeos inibidores da ECA foram derivados de plantas e animais. Atualmente, não há evidências na literatura sobre BPP em Mygalomorphae ou em aranhas do gênero Acanthoscurria geniculata. O presente estudo relata, pela primeira vez, uma purificação e caracterização cinética e estrutural preliminar de um peptídeo inibidor da ECA presente no veneno da tarântula Acanthoscurria geniculata. O veneno bruto foi obtido por eletroestimulação e fracionado por cromatografia de exclusão em coluna de Sephadex G75, seguido por cromatografia líquida de fase reversa (rp-HPLC) utilizando um sistema Accela 600 (Thermo) e uma coluna analítica C-18. O peptídeo puro foi obtido por uma etapa adicional de rp-HPLC e sua massa molecular foi determinada por MALDI-MS. A sequência da extremidade N-terminal foi obtida pelo sequenciamento EDMAN. A atividade inibitória da ECA foi avaliada pelo método do ensaio com furanacriloil-L-fenilalanilglicilglicina (FAPGG). O FAPGG e seu produto de digestão (FAP) foram monitorados por HPLC-UV a 306 nm durante 60 minutos, utilizando uma concentração fixa de ECA comercial extraída de suspensão de coelho. Para determinar a velocidade inicial da evidência enzimática, esta foi verificada em diferentes tempos e variando-se como concentrações do substrato. Nossos resultados mostraram que o peptídeo inibidor apresentou um pico de íon protonado em m/z 8581,2 Da. O peptídeo inibiu a ECA em coelhos de forma semelhante ao captopril. Os parâmetros cinéticos da ECA foram determinados pelos gráficos de Lineweaver-Burk, obtendo-se K_M e V_max de 124,9 μmol.min^-1 e 909,1 μmol.min^-1, respectivamente, e as configurações de exclusão estão sendo avaliadas. Este BPP, extraído do veneno de A. geniculata , é o primeiro peptídeo inibidor da ECA.