Bacteriocinas são peptídios antimicrobianos que destroem ou inibem o crescimento de outras bactérias taxonomicamente relacionadas com a cepa produtora. Por esta capacidade, tem sido atribuída sua utilização como bioconservadores em alimentos. Dentre as bacteriocinas estudadas, encontra-se as enterocinas produzidas por Enterococcus spp, e a busca por novas bacteriocinas tem sido foco de muitos estudos científicos. O objetivo do trabalho foi avaliar a ação das enterocinas contra bactérias isoladas de alimentos, água e animais. Foram analisados 5 isolados de enterococos (Efm20, Efm22, Efm24, Efm25 e Efs27) conhecidamente produtores de enterocinas contra Listeria inoccua. O perfil genotípico dos genes produtores de enterocinas (entA, entB, entP, entX, LB50A, LB50B, ent1071, entQ, entX, ent e AS48) foram analisados via PCR. O espectro antimicrobiano e a unidade arbitrária foi testado contra cepas ATCC (5), bactérias provenientes de alimento (9), água (3) e animais (2). O sobrenadante livre de célula (CFS) foi obtido após o cultivo dos enterococos em meio MRS por 18 h à 37°C, centrifugados, ajustados pH para 6,5, filtrados em membrana 0,22 µm e armazenados em freezer -20°C. A atividade antimicrobiana de cada CFS foi feita por difusão em ágar (spot on the law); para avaliar a unidade arbitrária, os CFS foram diluídos 1:2 (v/v), e 100 µL de cada diluição foi depositada em uma microplaca com 100 µL da bactéria indicadora (10⁸ UFC mL^-1), e incubada à 37ºC. O crescimento foi determinado por espectrofotômetro (600nm). A unidade de atividade arbitrária (AU ml^-1) foi definida como a reciproca da última diluição que mostrou inibição de crescimento comparado com o controle negativo sem CFS multiplicado por 100. Os 5 produtores de enterocinas apresentaram genes entA, entB, entP e entX. O halo de inibição foi observado em 3 cepas ATCCs, em 4 das bactérias de leite, enquanto as demais bactérias provenientes de água e animais não apresentaram halo de inibição. Mesmo na máxima diluição do CFS (6400 AU mL^-1), foi observado inibição de crescimento da maioria das bactérias indicadoras. Estes dados sugerem ser os enterococos como um potencial produtor de enterocinas para inibição de bactérias contaminantes em alimentos.