Estratégias de redução de custos do processo de produção de etanol de segunda geração pelo uso de hidrólise enzimática passam pelo reciclo das enzimas. A literatura apresenta estudos bem definidos de reciclo das enzimas presentes na fração líquida dos hidrolisados, porém não há estudos de adsorção destas enzimas em lignina, principalmente, a lignina de bagaço de cana. O objetivo deste trabalho foi desenvolver metodologia para se avaliar os mecanismos de adsorção de enzimas hidrolíticas em lignina de bagaço de cana de açúcar que possibilite o desenvolvimento de estratégias de recuperação destas enzimas e sua reutilização no processo. O estudo compreendeu a determinação das isotermas de adsorção a diferentes valores de pH, temperatura e diferentes concentração de surfactantes e sal.