Os constantes derramamentos de óleos causados por empresas petrolíferas vêm causando grandes impactos no ambiente. Nesse contexto, os biossurfactantes são produzidos por micro-organismos e destacam-se na remoção de petroderivados em ambientes marinhos e terrestres. O objetivo, portanto, foi produzir um biossurfactante pela bactéria Pseudomonas aeruginosa UCP 992, cultivada em 0,5% de milhocina e 4,0% de resíduo de óleo vegetal em biorreator de 1,2 L, empregando um Delineamento Composto Central Rotacional (DCCR). As condições de cultivo foram velocidade de rotação, tempo, aeração e tamanho do inoculo, avaliando-se a redução da tensão superficial e o rendimento. Os melhores resultados foram sob aeração de 0,5 vvm, com 4,0% do inóculo, a 250 rpm e durante 84 horas, resultando em uma tensão superficial de 25,868 mN/m e uma extração de 20,855 g/L. O DCCR identificou as melhores condições para produção do biossurfactante e apresentou propriedades promissoras da biomolécula para biorremedição