Produção de uma molécula recombinante híbrida de duas proteínas de Streptococcus pneumoniae: PspA94-PdT
A baixa cobertura de sorotipos das vacinas atuais contra S.pneumoniae tem levado à busca por novos antígenos que ofereçam proteção independente de sorotipos. Este trabalho propõe a produção de um híbrido das proteínas PspA e Ply geneticamente detoxificada (PdT), que mostrou-se imunogênico e protetor em camundongos. Para isso a molécula foi obtida em E.coli com cauda de histidina. Cultivos foram realizados em reator de 5L e a purificação seguiu as etapas: ruptura celular em homogeneizador contínuo de alta pressão, precipitação com detergente CTAB, clarificação, cromatografias de troca aniônica e de interação hidrofóbica, alcançando 85% de pureza e recuperação de 4%. A baixa recuperação ocorreu devido à instabilidade do híbrido. Duas bandas principais foram observadas na eletroforese, correspondendo a cada uma das proteínas do híbrido, tal como revelado por Western Blot. Novos híbridos estão sendo construídos com espaçadores rígido e flexível a fim de aumentar a estabilidade.