O objetivo do estudo foi avaliar o biodiesel 3G produzido a partir do cultivo heterotrófico da cianobactéria Phormidium sp. empregando manipueira, como fonte de carbono orgânico. Os experimentos foram conduzidos em um biorreator de coluna de bolhas e volume nominal de trabalho de 2L. As condições experimentais foram: razão C/N de 68, concentração inicial de inóculo de 100mg/L, pH de 7,6, temperatura de 30ºC, aeração constante de 1VVM e ausência de luminosidade. Os resultados obtidos indicaram produtividades de biomassa e lipídica de 53,12mg/L.h e 7,45mg/L.h, respectivamente. As propriedades do biodiesel analisadas, conteúdo de ésteres, número de cetano, índices de saponificação e de iodo, grau de instauração, fator de comprimento da cadeia e ponto de entupimento de filtro a frio apresentam enquadramento quanto às normas nacionais e internacionais. Os resultados demonstraram potencialidade de produção de biodiesel de 3ª geração a partir do cultivo de Phormidium sp. em manipueira.