Biobutanol obtido por fermentação clostridial representa um importante biocombustível. Neste cenário, desenvolveu-se um método baseado na densidade da mistura para determinação da concentração dos solventes acetona, butanol e etanol (ABE) como alternativa ao uso de métodos baseados em cromatografia. Para esta proposta, diversos pontos de calibração foram preparados usando diferentes meios de cultura para representar condições reais para a fermentação clostridial. As densidades das misturas foram determinadas para concentrações de ABE variando entre 0 e 25 g/L, em três diferentes níveis de concentração de açúcar para representar a evolução do meio durante a fermentação. Os resultados obtidos demonstram uma relação linear da variação da densidade com as concentrações de ABE e açúcares. A principal contribuição deste trabalho foi a determinação da concentração dos solventes ABE com uma metodologia simples, rápida e de baixo custo.