Análise proteica da secreção cutânea de Dermatonotus muelleri: Eletroforese (SDS-PAGE) versus Espectrometria de Massa (MALDI-ToF)

A pele dos anfíbios desempenha funções essenciais a sua sobrevivência como a respiração, excreção, controle de temperatura, entre outros, sendo considerados bioindicadores do ambiente. Além disso, a secreção cutânea demonstra grande diversidade de compostos moleculares que combatem microrganismo em sua pele. Desde a década de 80, tais compostos vêm sendo estudados, onde se encontrou substâncias bioativas como esteroides e alcaloides e peptídeos com propriedades na defesa contra patógenos. Com isso, o interesse biotecnológico nesses animais vem crescendo, pois com a resistência de microrganismos a fármacos convencionais, esses compostos bioativos podem ajudar no desenvolvimento de alternativas no combate a bactérias patogênicas. Sendo assim, o objetivo desse trabalho foi analisar e comparar o perfil proteico da secreção cutânea do anuro Dermatonotus muelleri utilizando os métodos de Eletroforese e Espectrometria de Massa. O perfil eletroforético demostrou 16 bandas proteicas onde as majoritárias foram de 205, 30, 14 e 21 kDa. Na espectrometria de massa (EM) os resultados demostraram quatro massas moleculares de peptídeos: 3,13; 3,88; 5,24 e 6,97 kDa. Comparando os resultados demonstrados com espécies da Família Hylidae, a maioria dos trabalhos nessa vertente, exibem massas proteicas semelhantes. Massas próximas a 6,5 kDa podem representar a hylaserpina que tem 6,1 kDa, uma inibidora de tripsina e quimiotripsina com atividade bacteriostática contra Gram-positivas, descoberta na secreção de Hyla simplex. Proteínas chamadas Kazal possuem massas moleculares em torno de 6,6 e 6,7 kDa e foram encontradas na espécie Phyllomedusa sauvagei, que são inibidoras de proteases, bactericida e induz a aglutinação dos eritrócitos. Concluiu-se que, por meio dos dois métodos, obteve-se o perfil proteico da secreção cutânea do D. muelleri, sendo que cada método demonstrou sua especificação na detecção das massas das moléculas proteicas e utilizados em conjunto se torna uma ferramenta importante para a seleção e identificação de moléculas candidatas no desenvolvimento de novos biofármacos.